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色譜柱固定相填充方法與技巧

點擊次數(shù):1732 發(fā)布時間:2018-04-25
  色譜柱固定相填充方法與技巧
  色譜柱在色譜儀分析檢測過程中起著分離樣品組分的作用,其分離度直接影響色譜儀檢測的靈敏度和速率。影響色譜柱分離度的因素包括固定相和流動相的選擇、流速和溫度的控制、理論塔板度和塔板數(shù)、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復性。
  其中,組分在色譜柱上的分離效果,主要取決于用在填充色譜柱的固定相。 固定相填充質量的好壞直接影響填充柱的柱效,因此,色譜柱固定相的填充方法也是重要的。一根填充質量較的色譜柱,通常其理論塔板數(shù)應該達到2000-3000/m,根據(jù)填充物粒度的大小,可分為濕法裝柱和干法裝柱。
  濕法裝柱是把硅膠用適當?shù)娜軇┌鑴蚝?,再填入柱子中,然后再加壓用淋洗?走柱子",本法zui大的點是一般柱子裝的比較結實,沒有氣泡。
  干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠,然后再輕輕敲打柱子兩側,至硅膠界面不再下降為止,然后再填入硅膠至合適度,zui后再用油泵直接抽,這樣就會使得柱子裝的結實。接著是用淋洗劑"走柱子",一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。
  濕法裝柱和干法裝柱這二者各有劣,不論干法還是濕法,硅膠(固定相)的上表面一定要平整,并且硅膠(固定相)的度一般為15cm左右,太短了可能分離效果不好,太長了也會由于擴散或拖尾導致分離效果不好。為了獲得*的填充密度,可選擇適當?shù)募訅?、減壓或是手工填充的方法進行填充色譜柱。
  (1)加壓法 加壓法是將填充柱的一端塞好硅烷化的玻璃棉,另一端與填料池連接。將固定相倒入填料池,填料池的另一端出口與氮氣或空氣鋼瓶的減壓閥連結。對于常見內(nèi)徑為4.5mm的填充柱,可調(diào)節(jié)氣流為30ml/min(氣流應隨內(nèi)徑大小作相應調(diào)整),將填充池內(nèi)的固定相壓入填充柱中,同時用木棒輕敲填充柱體使固定相填充均勻。裝柱要求要填充得均勻,緊密,切忌有空隙。固定相填充完畢后,在原來連接填充池的一端塞上硅烷化的玻璃棉,注意這一端應該與色譜儀的進樣室相連接,另一端作為出口端與檢測器相連接,不能接反。 加壓柱是一種比較好的方法,與常壓柱類似,只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣,雙連球或者小氣泵(給魚缸供氣的就行)。是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過大,不然溶劑走的太快就會減低分離效果。
 ?。?)減壓法 減壓法一般用于填充長柱子。這個方法采用真空泵抽氣,將填充柱的一端塞好硅烷化的玻璃棉后與真空泵的緩沖安瓶相連接。為了防止抽氣時潮濕空氣進入而使固定相性能受影響,可以在填料池加入固定相后,在入氣口接氯化鈣和硅膠干燥塔,其他操作過程與加壓填充法相同。 減壓柱能夠減少硅膠的使用量,感覺能夠節(jié)省一半甚至更多,但是由于大量的空氣通過硅膠會使溶劑揮發(fā)(有時在柱子外面有水汽凝結),以及有些比較易分解的東西可能得不到,而且還必須同時使用水泵抽氣(的噪音,而且時間長)。
  (3)手工填充法 手工填充法一般只用于某些涂有沸點較低固定液的固定相的填充。通常采用邊裝邊敲打的辦法。每次加進柱內(nèi)的填料約5cm。填充時應注意兩點:
  一是固定相要填充均勻和緊密適度,柱內(nèi)不留有死空間或者間隙;
  二是要避免填充過程中敲打振動過猛,造成固定相機械粉碎。
  壓力可以增加淋洗劑的流動速度,減少產(chǎn)品收集的時間,但是會減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時候,常壓柱是效率zui的,但是時間也zui長。

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